Questões de Química da FUVEST

Formas de interface para introdução de amostras no espectrômetro de massas utilizando-se a fonte eletrospray (ESI) são a cromatografia líquida, eletroforese em gel de poliacrilamida e eletroforese capilar. 

Após a detecção do íon precursor no modo varredura (MS1), para ser possível a detecção dos fragmentos de uma molécula (espectro de MS2), é necessário aumentar a voltagem da fonte de ionização para gerar fragmentos na fonte. 

Para a obtenção do íon molecular de compostos biológicos, pode-se utilizar ionização por elétrons (EI) e sua evolução, ionização por eletrospray (ESI), pois são métodos considerados brandos, não necessitam de derivatização e nem induzem a fragmentação das moléculas, além de ocorrerem a pressão atmosférica. 

Moléculas neutras precisam ser ionizadas no analisador de massas para serem detectadas.

A fonte de ionização do tipo MALDI produz íons com poucas cargas (geralmente 1 ou 2), necessitando de um detector capaz de monitorar um intervalo de massas maior para detecção de moléculas com massa alta.

A análise MS/MS tem como principal finalidade fornecer a massa exata do composto de interesse, sem a necessidade de estudar padrões de fragmentação ou realizar experimentos adicionais para confirmação estrutural.

A técnica MS? é utilizada exclusivamente para análise de compostos voláteis, enquanto a espectrometria de massas em tandem (MS/MS) é aplicada apenas para biomoléculas de alto peso molecular, como proteínas e lipídeos.

As estratégias MS/MS e MS? não são aplicáveis para diferenciação de isômeros ou elucidação estrutural detalhada, sendo utilizadas apenas para identificação preliminar com base na massa do íon precursor.

O uso de espectrometria de massas de múltiplos estágios (MS?) não traz benefícios adicionais em relação à análise convencional de espectrometria de massas (MS), pois a fragmentação repetida dos íons não melhora a identificação de compostos complexos.

Os padrões internos devem ter propriedades químicas e físicas diferentes da molécula a ser quantificada, além de serem puros, ausentes na amostra e inertes em relação aos compostos presentes.

O padrão interno deve ser adicionado após a etapa de limpeza ou enriquecimento para evitar alterações na concentração do padrão durante o preparo da amostra.

Os padrões internos isotopicamente marcados corrigem erros relacionados a variações no processo de preparo da amostra, e no volume de injeção mas não corrigem as variações relacionadas a diferenças na ionização (efeito matriz).

Isótopos marcados do analito (isotopólogos) são os padrões internos ideais, pois possuem estrutura idêntica e diferem apenas na massa, garantindo eficiência de ionização e comportamento cromatográfico semelhantes.

Os padrões internos devem eluir em tempos de retenção distintos do analito para que a quantificação seja realizada de forma precisa e seletiva.

Ionização por electrospray (ESI) é uma técnica de ionização suave que gera íons da solução em fase gasosa por meio do impacto de elétrons na molécula.

Em ESI, o número de cargas em uma molécula depende basicamente de seu peso molecular e do número de sítios potenciais para protonação, desprotonação ou cationização.

Proteínas e peptídeos ionizados por ESI adquirem uma única carga, o que facilita a caracterização estrutural.

Na dessorção/ionização a laser assistida por matriz (MALDI), o analito deve ser dissolvido em uma solução orgânica volátil antes da ionização, tornando essa técnica ideal para a análise de pequenas moléculas em solução.

Ionização química à pressão atmosférica (APCI) é uma técnica de ionização na qual íons são gerados por descargas corona, sendo mais adequada para compostos de alta massa molecular e pouco voláteis, como proteínas. 

O espectrômetro de massas produz íons a partir de amostras líquidas diretamente no detector em alto vácuo. 

Os íons da amostra carregados positivamente ou negativamente são separados com base na conformação espacial no analisador de massas.

Em espectrômetros de massas do tipo tandem, os íons selecionados no quadrupolo são fragmentados em uma célula de colisão, e os fragmentos resultantes são analisados em um segundo analisador.

O detector é responsável por separar os íons com base em sua razão massa/carga (m/z), convertendo os sinais elétricos em abundância relativa.

Os sinais elétricos provenientes dos íons detectados no analisador de massas são transmitidos para o computador para gerar o espectro de massas.