A observação de estruturas com dimensões muito menores que o comprimento de onda da luz usando microscópios é difícil devido ao limite de difração de Abbe. Ernst Abbe expressou matematicamente esse limite em 1882, estabelecendo que a menor distância que pode ser resolvida por um microscópio para uma luz de comprimento de onda ???? é de:
onde d é a resolução lateral (XY), ou seja, a distância mínima distinguível da observação de dois pontos, e NA é a abertura numérica da objetiva.
Considere um microscópio confocal operando com um laser de excitação de 488 nm e uma objetiva com abertura numérica de 1,4. Qual das seguintes afirmações está correta sobre a resolução alcançada nesse sistema?
A resolução lateral do sistema será, aproximadamente, 174 nm, indicando que estruturas menores do que esse valor não podem ser resolvidas.
O aumento da abertura numérica da objetiva para 1,6 diminuiria o valor da resolução lateral alcançada, tornando a imagem menos detalhada.
O uso de um laser de excitação no infravermelho melhoraria a resolução lateral do microscópio confocal, devido ao menor espalhamento da luz.
A microscopia confocal supera a barreira de difração e permite a visualização direta de estruturas subnanométricas sem técnicas complementares.
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