Listagem de Questões sobre Geral
São rotineiramente utilizadas como técnicas de purificação de macromoléculas empregadas nos protocolos de purificação em larga escala de ácidos nucleicos vegetais:
precipitação seletiva através de solubilidade diferencial e extração com solventes orgânicos;
extração com solventes orgânicos e cromatografia de peneira molecular;
precipitação seletiva através de solubilidade diferencial e eletroforese de isoeletrofocalização;
cromatografia de troca iônica e cromatografia de peneira molecular.
São características essenciais de um vetor de clonagem a presença de:
um sítio de recombinação, genes para mobilização e sítios únicos de restrição para clonagem;
uma origem de replicação, uma seqüência promotora e um gene de seleção;
uma origem de replicação, um gene de seleção e sítios únicos de restrição para clonagem;
uma origem de replicação, genes para mobilização e um gene de seleção;
uma seqüência promotora, um sítio de recombinação e genes para mobilização.
Os vetores de clonagem que devem ser utilizados, respectivamente, para as seguintes clonagens são:
Situação 1 – Clonagem de um fragmento genômico de 200Kb
Situação 2 – Clonagem de um cDNA de 1Kb
Situação 3 – Clonagem para introdução de um gene no genoma de uma planta
cromossoma artificial de levedura, plasmídeo, vetor binário de T-DNA;
plasmídeo, cromossoma artificial de bactéria, cosmídeo;
vetor Binário de T-DNA, cromossoma artificial de levedura, vetores baseados no bacteriófago Lambda;
bacteriófago Lamba, vetor binário de T-DNA, plasmídeo;
cosmídeo, vetores baseados no bacteriófago Lamba, cromossoma artificial de leveduras.
O sistema Duplo Híbrido (Two-hybrid system) é uma técnica para a identificação e isolamento de genes que vem sendo largamente utilizada para a identificação de novos genes e redes regulatórias. O desenvolvimento desta técnica se encontra baseado na:
interação antígeno-anticorpo;
interação proteína-proteína que ocorre com os fatores de transcrição;
Um pesquisador interessado no estudo da regulação da expressão tecidual de um gene preparou fusões de diferentes segmentos do promotor deste gene com um gene marcador. Cinco construções foram obtidas e introduzidas no cromossoma do organismo através de transformação genética. Após a análise do padrão de expressão do gene marcador, os seguintes resultados foram obtidos:
Analisando os resultados apresentados, pode-se concluir que os elementos reguladores responsáveis pela expressão do gene em flores, folhas e caule estão localizados, respectivamente, entre as posições:
-3000 e -2000; -2000 e -1000; -1000 e -500;
-5000 e -3000; -3000 e -2000; -2000 e -1000;
2000 e -1000; -1000 e -500; -500 e -1;
-5000 e -3000; -5000 e -2000; -5000 e -1000;
-5000 e -2000; -5000 e -2000; -5000 e -500.
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