A partir do desenvolvimento da eletroforese em gel, vários

A A fim de tornar possível a detecção das proteínas por meio de anticorpos, realiza-se a sua transferência do gel para uma membrana, colocando-se gel e membrana face a face e aplicando-se uma força de aproximadamente 10 newtons sobre o sistema. B Antes da transferência das proteínas para a membrana, deve-se realizar seu bloqueio, geralmente com proteínas do leite ou albumina sérica, para impedir que proteínas indesejáveis se liguem à membrana durante a imunodetecção por western blotting. C A separação das proteínas por eletroforese ocorre pela sua migração em um gel polimérico, geralmente poliacrilamida, e é impulsionada por um campo elétrico, de modo que os fragmentos maiores se movem com maior facilidade e velocidade.  D Na eletroforese unidimensional, quando submetidas a um campo elétrico em pH próximo à neutralidade, as proteínas são atraídas para o polo positivo e repelidas pelo polo negativo.  E Na eletroforese bidimensional, as proteínas são primeiramente separadas de acordo com a carga elétrica; os fragmentos carregados negativamente movem-se mais rapidamente, enquanto os de carga positiva movem-se mais lentamente. A separação de acordo com o peso molecular ocorre após essa etapa.