O sistema Duplo Híbrido (Two-hybrid system) é uma técnica para a identificação e isolamento de genes que vem sendo largamente utilizada para a identificação de novos genes e redes regulatórias. O desenvolvimento desta técnica se encontra baseado na:
Os vetores de clonagem que devem ser utilizados, respectivamente, para as seguintes clonagens são:
Situação 1 – Clonagem de um fragmento genômico de 200Kb
Situação 2 – Clonagem de um cDNA de 1Kb
Situação 3 – Clonagem para introdução de um gene no genoma de uma planta
São características essenciais de um vetor de clonagem a presença de:
São rotineiramente utilizadas como técnicas de purificação de macromoléculas empregadas nos protocolos de purificação em larga escala de ácidos nucleicos vegetais:
Dentre as estratégias de transformação genética de plantas, o sistema baseado na utilização da bactéria de solo Agrobacterium tumefaciens se destaca pela sua altaeficiência e relativa simplicidade. Na natureza esta bactéria apresenta um plasmídeo que contém todos os componentes necessários para o processo de transferência de DNA para a célula vegetal (plamídeo Ti). São essenciais para esse processo:
Um pesquisador interessado no estudo da regulação da expressão tecidual de um gene preparou fusões de diferentes segmentos do promotor deste gene com um gene marcador. Cinco construções foram obtidas e introduzidas no cromossoma do organismo através de transformação genética. Após a análise do padrão de expressão do gene marcador, os seguintes resultados foram obtidos:
Analisando os resultados apresentados, pode-se concluir que os elementos reguladores responsáveis pela expressão do gene em flores, folhas e caule estão localizados, respectivamente, entre as posições:
Visando o estudo da regulação do metabolismo de lactose em bactérias foi obtida uma cepa mutante na qual o gene do repressor do Operon da Lactose foi deletado. Esta cepa foi então cultivada em duas situações metabólicas distintas:
Situação 1 – presença de lactose e ausência de glicose.
Situação 2 – ausência de lactose e ausência de glicose.
Situação 3 – presença de lactose e presença de glicose.
Ao analisar a transcrição dos genes do Operon da Lactose, desta mutante, nestas três situações, pode-se constatar que ocorrerá transcrição apenas:
Interessado em estudar a tradução de um gene, um pesquisador introduziu as seguintes mutações pontuais em diferentes regiões do gene em estudo:
I - retirada de uma base na região 5' não traduzida;
II - retirada de uma base na região codificante;
III - troca do nucleotídeo A do primeiro códon ATG por uma base C.
Ao se analisar a produção da proteína em questão, os resultados esperados são, respectivamente:
