A maior dificuldade na clonagem de um gene que é a identi...

Em condições de estringência severas, com altas temperaturas, ou com baixa concentração de sais, não ocorre pareamento de bases, mesmo que as seqüências sejam perfeitamente complementares.

Para que ocorra hibridização, ou pareamento, as sondas utilizadas devem ser perfeitamente complementares, independentemente do grau de estringência utilizados.

Na hibridização de colônias de bactérias, em meio de cultura sólido, as bactérias são tratadas com álcali por 5 minutos. Em seguida, acrescenta-se à superfície do meio, as sondas marcadas com radioativaidade e incuba-se para que haja hibridização.

O relaxamento nas condições de estringência pode levar a imperfeições no pareamento entre as fitas. Embora haja perda da especificidade, esse procedimento permite detectar seqüências parcialmente similares.