A iluminação de Köhler é o ajuste dos planos focais do microscópio óptico. Para realizar esta iluminação é preciso inicialmente focalizar uma lâmina. Em seguida, fecha-se o diafragma de campo que formará um círculo ou um hexágono luminoso. E, para centralizar esta figura geométrica no campo visual, o seguinte mecanismo do microscópio deve ser utilizado:
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